产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. 即开即用

用户只需提供样品DNA模板即可使用。

2. 优化的引物

经过优化的引物等组分，具有高灵敏度。

3. 提供阳性对照

阳性对照的提供使得假阴性样品的区分更加方便。

4. 高特异性

引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，确保不与其他生物样本的DNA产生交叉反应。

5. 定性与定量检测

本试剂盒既可用于定性检测，也可用于定量检测，定量检测时线性范围至少达到五个数量级。

6. 足够的试剂量

本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研用途

此产品仅限于科研使用。

方法

一、DNA提取（样本制备区）

用户可根据自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

1. 标记6个离心管，分别标记为7、6、5、4、3、2。

2. 使用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H₂O。

3. 在7号管中加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），充分震荡1分钟，得1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放于冰上待用。

4. 换枪头后，在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。

5. 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10⁶拷贝/μL阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁵拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。

6. 重复以上操作得到6个稀释度的标准曲线样品，放冰上待用。若不需要制作标准曲线，则将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），各PCR管中分别加入相关成分（详见说明书，欢迎向尊龙凯时人生就博咨询）。

四、添加模板（模板添加区）

向各qPCR管中分别加入2μL模板，加入顺序为阴性对照（DEPC-H₂O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒，及时进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽中进行扩增，扩增程序详见说明书（欢迎咨询尊龙凯时人生就博）。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，横轴为阳性对照浓度的log值，纵轴为Ct值，绘制标准曲线。根据待测样品的Ct值推算出其DNA浓度的log值。

2. 若不制作标准曲线，则根据以下标准判定结果：阳性对照结果Ct值<30且有明显的指数增长，呈S型曲线；阴性对照结果Ct值为38或无Ct值，无明显指数增长；样本检测结果Ct值<35且有明显的指数增长，表明样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值在35-38范围需复检。

运输及保存

本产品应低温运输，储存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照应单独放置，避免污染其他试剂。