一、基本概念

1. 细胞系（Cell Line）

细胞系是指从原代培养物中经过首次传代而成功建立的细胞群体，这些细胞属于相同的细胞世系（Lineage of Cells）并具有共同的特性。

2. 细胞株（Cell Strain）

细胞株是通过选择性或克隆法从原代培养物或细胞系中获得的，具有特定性质或标志的细胞群体。这些特定性质或标志在整个培养过程中必须保持不变。细胞株可分为有限细胞株（finite cell strain）和连续细胞株（continuous cell strain），分别指代能否无限传代的细胞系。人类肿瘤细胞在体外培养超过六个月且能够稳定传代的则称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的基本要求

Establishing a recognized cell line or strain requires specific conditions that会因情况而异，没有统一的标准。对用于原代培养的细胞，要求供体的均一性、取材部位及组织类型等条件稳定。例如，针对长期培养尤其是需要反复传代的细胞，通常需提供以下信息：

1. 组织来源

应当详细说明细胞供体的物种、性别、年龄及取材器官或组织。若是肿瘤组织，则需提供临床和病理诊断信息及病历号等。

2. 细胞生物学检测

需对细胞的一般和特殊生物学特性进行分析，如细胞形态、特异结构、细胞生长曲线、分裂指数和倍增时间。对于肿瘤细胞，还需进行关于原肿瘤组织来源及恶性特性的实验。

3. 培养条件和方法

应详细描述细胞系（或株）所需的培养环境，包括使用的培养基、血清种类、用量及适宜的pH值。

三、细胞培养的重要要点及基本步骤

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：主要来源于外科手术或活检，需选择活性较好的瘤细胞部分，并避免使用坏死组织。

2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常常混杂成纤维细胞，这些细胞可能会抑制肿瘤细胞的生长，因此需通过机械刮除、反复贴壁法或消化排除法等手段进行去除。

3. 提高肿瘤细胞存活率和生长率：肿瘤细胞在体外培养较为困难，因此需採用特定措施如适宜底物及细胞生长因子，以促进细胞适应新环境，增强其生长能力。

（二）人类淋巴母细胞培养方法

1. 取4ml肝素抗凝血于离心管，加入2ml RPMI 1640培养基。

2. 混匀后慢慢沿管壁加入4ml淋巴细胞分离液，静置30分钟。

3. 以1500rpm离心15分钟，取白细胞层（第二层）至另一离心管中。

4. 用RPMI 1640洗涤白细胞两次，加入培养基中接种。

5. 加入环胞霉素与EBV液，混匀后在37℃水浴摇床培养3小时。

6. 之后再以1500rpm离心15分钟，将细胞接种于含谷氨酰胺的培养基，37℃培养。若经过5天后细胞转化和生长良好，可决定是否换液。

7. 最后待细胞数量明显上升后，转入更大培养瓶中继续培养，直至细胞量达到冻存要求并进行核型分析及存档。

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