尊龙凯时人生就博为您提供RFL-6大鼠成纤维细胞的培养指南，确保您在实验中取得最佳效果。

一、细胞培养条件

细胞名称： RFL-6大鼠成纤维细胞
生长特性： 贴壁生长
冻存条件： 使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系： DMEM+10% FBS+1% 双抗
传代方法： 第一次建议采用1:2比例传代，传代情况建议每2天换液。

备注： 用无菌离心管收集培养瓶子中的培养基，留作对照培养。如果对照效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，培养至良好状态，并灌满完全培养液，再封好瓶口，这是最佳的运输细胞方式。使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒后，将其放入超净台内，在无菌环境下操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后，继续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存，建议40x、100x、200x各拍一张，以便售后依据。如果前三天未提供照片，将默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，并保留5ml完整培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超80%，可进行如下步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 细胞变圆并脱落后，迅速吹打细胞，用5ml完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打，使细胞完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，重新加入1-2ml完全培养基重悬。
5. 按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩后加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需至少在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因粘附不牢而脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将瓶中培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟后，收集上清作对照培养。沉淀的细胞可添加胰酶进行处理。处理后，按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基并放入细胞培养箱中。

五、售后条款

尊龙凯时人生就博承诺为客户提供优质的细胞产品。如遇以下情况可进行重发：

1. 运输途中导致的细胞丢失、瓶破损或培养液严重泄漏。
2. 48小时内提出的细胞污染问题，经核实后重发。
3. 复苏后72小时内细胞存活率低的情况，需提供真实照片。

以下情况不予重发：

1. 由于客户造成的细胞污染。
2. 因不当操作导致细胞状态不佳。
3. 非推荐培养体系导致的细胞状态不良。

尊龙凯时人生就博期待您亲身体验优质的细胞产品与服务！